طرق نقل النباتات المزروعة :-
1 - نضع الأصيص في صوبة حتي يصبح متأقلم ونعمل علي رش رزاز متقطع لمدة أسبوع
2 - ننكس إناء زجاجي علي الأصيص في اليوم الأول يكون الإناء محكم وبعد مرور 24 ساعة نرفع الغطاء فترة وجيزة ثم نعيد تنكيسه وهكذا وفي كل مرة نزود فترة رفع الغطاء حتى يتأقلم النبات .
الظواهر المصاحبة لعملية الأقلمة :-
نتيجة عملية الأقلمة تحدث العديد من التغيرات الكيميائية والفسيولوجية والمورفولوجية
أولاً التغيرات الكيميائية والفسيولوجية :-
1 - زيادة نسبة الماء المرتبط غير الحر .
2 - زيادة نسبة السكر المختزل وغير المختزل وقلة النشا .
تحول البروتينات إلي أحماض أمينية .
ثانياً التغيرات المورفولوجية :-
- زيادة الطبقة الشمعية علي الأوراق للحماية من البرودة .
القوام الجلدي للأوراق .
نقص الحجم , حجم الأوراق يقل .
زيادة نسبة المادة الجافة .
قلة نسبة الماء القابلة للتجمد نتيجة ارتفاع الضغط الأسموزي .
الأجزاء النباتية المستخدمة في زراعة الأنسجة Explants :-
تتنوع الأجزاء النباتية المستعملة في زراعة الأنسجة وذلك علي حسب :-
نوع النبات - هدف الدراسة .
فقد نستخدم :-
القمم النامية للبراعم - الجذور - أي جزء من الورقة - برعم جانبي - جزء من الحزم الوعائية للجذور - أو يتم استخدام المتك أو حبوب اللقاح المعزولة أو الأجنة المعزولة عقب التلقيح والإخصاب أو نستخدم البويضات أو المبيض كله وما يحمله من بويضات بعد إزالة أغلفة المبيض .
ويشترط في الجزء النباتي المستخدم :- قدرته علي الانقسام الميتوزي حيث يعتبر اختبار الجزء النباتي المستعمل وكذلك مرحلة نمو هذا الجزء ذات أهمية كبيرة في زراعة الأنسجة وفي جميع الأحوال يجب تعقيم الجزء النباتي المستخدم قبل البدء في زراعة الأنسجة ومن أبسط الطرق المستخدمة في التعقيم هي غمس النسيج في كحول لعدد قليل من الثواني ثم يعامل بمحلول كلوراكس 5 - 15 % لمدة 5 - 20 دقيقة .
طرق التعقيم في زراعة الأنسجة :-
تختلف طريقة التعقيم حسب الجزء المراد تعقيمه كالتالي :-
1 - يتم تعقيم المعمل كلياً بالفورمالين .
2 - يتم تعقيم الأدوات الزجاجية والمعدنية علي درجة حرارة 160 ْ م لمدة 4 ساعات في الاوتوكلاف .
أو في الفرن مباشرةً علي درجة 200 ْم لمدة 4 - 24 ساعة .
3 - يتم تعقيم البيئة في الأوتوكلاف علي درجة حرارة 121 ْم وضغط 15 ضغط جوي لمدة 15 دقيقة .
ولا يمكن تعقيم البيئة في الفرن مباشرةً لعد وجود ضغط به حيث أن الضغط هو الذي يقوم بالتعقيم وقتل الميكروبات وليست الحرارة .
الهرمونات ومنظمات النمو يتم تعقيمها بواسطة المرشحات وهي لها أشكال وطرق مختلفة في التعقيم :-
فبعض منها عبارة عن إناء زجاج من أعلى ومن أسفل إناء آخر وبالمنتصف المرشح حيث يتم وضع الهرمونات أو منظمات النمو أعلى فيحدث لها ترشيح وفصل الميكروبات خلال المرشح ثم تتجمع في الإناء السفلي .
الأجزاء النباتية :-
يتم تعقيمها بالكلوراكس ( هيبو كلورات صوديوم ) 5 % لمدة 15-20 دقيقة .
أو بتركيز 10 % - 20 % لمدة 10 - 30 دقيقة . أو باستخدام الكحول 70 % لمدو 1 - 5 دقائق
أو باستخدام الكحول المطلق 90 % لمدة ثواني ثم الغسيل بالماء المقطر مرتين عدد 2 - 3 مرات .
البذور :- يتم تعقيمها بنترات الفضة أو محلول السليماني .
ملحوظة :-
يمكن استخدام المضادات الحيوية عندما يكون النبات مصاباً من الداخل كوسيلة للتعقيم ويكون النبات المصاب هام جداً فيستخدم المضادات الحيوية مثل الأبسيمين واسع المفعول ومدى استخدامه 50 - 150 ميكروجرام /مم3 .
مكونات البيئة الغذائية المستعملة في زراعة الانسجة :-
يجب أن تتوافر في البيئة الغذائية المستخدمة في زراعة الانسجة المكونات التالية:-
1 - مصدر طاقة :-
وهو عبارة عن أنواع السكريات المختلفة كالسكروز والجليكوز وتعتبر هذه السكريات مصدر الكربون أيضاً .
2 - مصدر الأملاح :-
مثل الكالسيوم والصوديوم والماغنسيوم وK وهي من العناصر الرئيسية في البيئة التي يتغذى عليها النبات النامي ونقص أي من العناصر قد يؤدي إلي ضعف النبات وقد يؤدي بحياته.
3 - مصدر الفيتامينات :-
مثل الثيامين Thiamin , وفيتامين B ,وحامض الأسكوربيك (فيتامينC) .
4 - الأحماض الأمينية :-
والمواد العضوية مثل الكازين المحلل أنزيمياً , الجلوتامين .
5- الهرومنات ( منظمات النمو ) :-
أ - أوكسينات :-
وهي هرمونات نباتية تسبب كبر وزيادة الخلايا في الحجم وتنشط تكوين الجذور وتتحكم في نمو وتكوين البراعم مثل أندول أسيتك آسيد 2.4D .
ب - سيتوكاينين :-
وهي هرمونات نباتية يختص بإنقسام الخلايا وزيادة نموها وتشكلها وتميزها مثل الكاينين وهي تشجع تكوين المجموع الخضري .
6- مركبات طبيعية :-
مثل كازين اللبن , لبن جوز الهند , مستخلص الخميرة .
7- الأجار :-
وتستخدم في حالة ما إذا كانت البيئة المطلوبة نصف صلبة .
8- يجب مراعاة ضبط الpH البيئة الغذائية في مدى 5.5 - 5.8 وهو أنسب التركيزات لاستفادة جميع الأجزاء النباتية من العناصر الغذائية الموجودة في البيئة وكذلك لإتمام جميع العمليات الفسيولوجية بنجاح .
أضرار الحرارة المرتفعة علي البيئة الغذائية :-
تختلف الكيماويات المستخدمة في البيئة الغذائية في تأثرها بدرجة الحرارة العالية .
حيث تؤثر درجة الحرارة تأثيراً كبيراً علي منظمات النمو كالتالي :-
الجبرلينات :-
يتكسر الجبرلين بنسبة 90 % في الأوتوكلاف علي درجة حرارة 121 ْ م لمدة 15 دقيقة وتحت 15 ض . ج .
الأوكسينات :-
NAA , IAA , 2.4.D تتحمل الحرارة مع أن IAA لا يتأثر بالتعقيم في الأوتوكلاف تحت الظروف العادية إلا أنه خاضع للانحلال بالعوامل الأخرى مثل ال pH حيث أن تغير ال pH يسرع من تحلل IAA .
السيتوكيتينات :-
لا يتأثر المحلول المائي من الكاينين والزياثين والبنزيلأدينين بدرجات الحرارة العالية .
من ناحية أخرى فإن تعريض الصورة الغير نشطة من مادة Substituted purine ولدرجات الحرارة العالية أثناء تعقيمها في الأوتوكلاف فإنها تتحول إلي الصورة النشطة Nb Substituted purine تساعد في تكوين الكالوس .
لا تؤثر الحرارة العالية علي حامض الأبسيسك ولكن يؤثر عليه الضوء .
الثايمين Hcl عند غليانه علي درجة حرارة 110ْ م في محلول مائي يتكسر بسرعة عندما يصل ال PH إلي 5, 5 .
أنثوسيانات الكالسيوم لا يمكن تعقيمه بالحرارة العالية وذلك لسرعة تكسره بالحرارة .
السكروز الثنائي هو أكثر الكربوهيدرات استخداماً في البيئة يتحللب التعقيم في الأوتوكلاف ليعطي مخلوط من D جليكوز , D فركتوز . بالإضافة إلي ذلك فإن التعقيم الحراري قد يكون له تفاعلات وسيطة داخل البيئة بين الكربوهيدرات والأحماض الأمينية .
البيروكسين يتحلل بسرعة بالحرارة العالية .
1 - نضع الأصيص في صوبة حتي يصبح متأقلم ونعمل علي رش رزاز متقطع لمدة أسبوع
2 - ننكس إناء زجاجي علي الأصيص في اليوم الأول يكون الإناء محكم وبعد مرور 24 ساعة نرفع الغطاء فترة وجيزة ثم نعيد تنكيسه وهكذا وفي كل مرة نزود فترة رفع الغطاء حتى يتأقلم النبات .
الظواهر المصاحبة لعملية الأقلمة :-
نتيجة عملية الأقلمة تحدث العديد من التغيرات الكيميائية والفسيولوجية والمورفولوجية
أولاً التغيرات الكيميائية والفسيولوجية :-
1 - زيادة نسبة الماء المرتبط غير الحر .
2 - زيادة نسبة السكر المختزل وغير المختزل وقلة النشا .
تحول البروتينات إلي أحماض أمينية .
ثانياً التغيرات المورفولوجية :-
- زيادة الطبقة الشمعية علي الأوراق للحماية من البرودة .
القوام الجلدي للأوراق .
نقص الحجم , حجم الأوراق يقل .
زيادة نسبة المادة الجافة .
قلة نسبة الماء القابلة للتجمد نتيجة ارتفاع الضغط الأسموزي .
الأجزاء النباتية المستخدمة في زراعة الأنسجة Explants :-
تتنوع الأجزاء النباتية المستعملة في زراعة الأنسجة وذلك علي حسب :-
نوع النبات - هدف الدراسة .
فقد نستخدم :-
القمم النامية للبراعم - الجذور - أي جزء من الورقة - برعم جانبي - جزء من الحزم الوعائية للجذور - أو يتم استخدام المتك أو حبوب اللقاح المعزولة أو الأجنة المعزولة عقب التلقيح والإخصاب أو نستخدم البويضات أو المبيض كله وما يحمله من بويضات بعد إزالة أغلفة المبيض .
ويشترط في الجزء النباتي المستخدم :- قدرته علي الانقسام الميتوزي حيث يعتبر اختبار الجزء النباتي المستعمل وكذلك مرحلة نمو هذا الجزء ذات أهمية كبيرة في زراعة الأنسجة وفي جميع الأحوال يجب تعقيم الجزء النباتي المستخدم قبل البدء في زراعة الأنسجة ومن أبسط الطرق المستخدمة في التعقيم هي غمس النسيج في كحول لعدد قليل من الثواني ثم يعامل بمحلول كلوراكس 5 - 15 % لمدة 5 - 20 دقيقة .
طرق التعقيم في زراعة الأنسجة :-
تختلف طريقة التعقيم حسب الجزء المراد تعقيمه كالتالي :-
1 - يتم تعقيم المعمل كلياً بالفورمالين .
2 - يتم تعقيم الأدوات الزجاجية والمعدنية علي درجة حرارة 160 ْ م لمدة 4 ساعات في الاوتوكلاف .
أو في الفرن مباشرةً علي درجة 200 ْم لمدة 4 - 24 ساعة .
3 - يتم تعقيم البيئة في الأوتوكلاف علي درجة حرارة 121 ْم وضغط 15 ضغط جوي لمدة 15 دقيقة .
ولا يمكن تعقيم البيئة في الفرن مباشرةً لعد وجود ضغط به حيث أن الضغط هو الذي يقوم بالتعقيم وقتل الميكروبات وليست الحرارة .
الهرمونات ومنظمات النمو يتم تعقيمها بواسطة المرشحات وهي لها أشكال وطرق مختلفة في التعقيم :-
فبعض منها عبارة عن إناء زجاج من أعلى ومن أسفل إناء آخر وبالمنتصف المرشح حيث يتم وضع الهرمونات أو منظمات النمو أعلى فيحدث لها ترشيح وفصل الميكروبات خلال المرشح ثم تتجمع في الإناء السفلي .
الأجزاء النباتية :-
يتم تعقيمها بالكلوراكس ( هيبو كلورات صوديوم ) 5 % لمدة 15-20 دقيقة .
أو بتركيز 10 % - 20 % لمدة 10 - 30 دقيقة . أو باستخدام الكحول 70 % لمدو 1 - 5 دقائق
أو باستخدام الكحول المطلق 90 % لمدة ثواني ثم الغسيل بالماء المقطر مرتين عدد 2 - 3 مرات .
البذور :- يتم تعقيمها بنترات الفضة أو محلول السليماني .
ملحوظة :-
يمكن استخدام المضادات الحيوية عندما يكون النبات مصاباً من الداخل كوسيلة للتعقيم ويكون النبات المصاب هام جداً فيستخدم المضادات الحيوية مثل الأبسيمين واسع المفعول ومدى استخدامه 50 - 150 ميكروجرام /مم3 .
مكونات البيئة الغذائية المستعملة في زراعة الانسجة :-
يجب أن تتوافر في البيئة الغذائية المستخدمة في زراعة الانسجة المكونات التالية:-
1 - مصدر طاقة :-
وهو عبارة عن أنواع السكريات المختلفة كالسكروز والجليكوز وتعتبر هذه السكريات مصدر الكربون أيضاً .
2 - مصدر الأملاح :-
مثل الكالسيوم والصوديوم والماغنسيوم وK وهي من العناصر الرئيسية في البيئة التي يتغذى عليها النبات النامي ونقص أي من العناصر قد يؤدي إلي ضعف النبات وقد يؤدي بحياته.
3 - مصدر الفيتامينات :-
مثل الثيامين Thiamin , وفيتامين B ,وحامض الأسكوربيك (فيتامينC) .
4 - الأحماض الأمينية :-
والمواد العضوية مثل الكازين المحلل أنزيمياً , الجلوتامين .
5- الهرومنات ( منظمات النمو ) :-
أ - أوكسينات :-
وهي هرمونات نباتية تسبب كبر وزيادة الخلايا في الحجم وتنشط تكوين الجذور وتتحكم في نمو وتكوين البراعم مثل أندول أسيتك آسيد 2.4D .
ب - سيتوكاينين :-
وهي هرمونات نباتية يختص بإنقسام الخلايا وزيادة نموها وتشكلها وتميزها مثل الكاينين وهي تشجع تكوين المجموع الخضري .
6- مركبات طبيعية :-
مثل كازين اللبن , لبن جوز الهند , مستخلص الخميرة .
7- الأجار :-
وتستخدم في حالة ما إذا كانت البيئة المطلوبة نصف صلبة .
8- يجب مراعاة ضبط الpH البيئة الغذائية في مدى 5.5 - 5.8 وهو أنسب التركيزات لاستفادة جميع الأجزاء النباتية من العناصر الغذائية الموجودة في البيئة وكذلك لإتمام جميع العمليات الفسيولوجية بنجاح .
أضرار الحرارة المرتفعة علي البيئة الغذائية :-
تختلف الكيماويات المستخدمة في البيئة الغذائية في تأثرها بدرجة الحرارة العالية .
حيث تؤثر درجة الحرارة تأثيراً كبيراً علي منظمات النمو كالتالي :-
الجبرلينات :-
يتكسر الجبرلين بنسبة 90 % في الأوتوكلاف علي درجة حرارة 121 ْ م لمدة 15 دقيقة وتحت 15 ض . ج .
الأوكسينات :-
NAA , IAA , 2.4.D تتحمل الحرارة مع أن IAA لا يتأثر بالتعقيم في الأوتوكلاف تحت الظروف العادية إلا أنه خاضع للانحلال بالعوامل الأخرى مثل ال pH حيث أن تغير ال pH يسرع من تحلل IAA .
السيتوكيتينات :-
لا يتأثر المحلول المائي من الكاينين والزياثين والبنزيلأدينين بدرجات الحرارة العالية .
من ناحية أخرى فإن تعريض الصورة الغير نشطة من مادة Substituted purine ولدرجات الحرارة العالية أثناء تعقيمها في الأوتوكلاف فإنها تتحول إلي الصورة النشطة Nb Substituted purine تساعد في تكوين الكالوس .
لا تؤثر الحرارة العالية علي حامض الأبسيسك ولكن يؤثر عليه الضوء .
الثايمين Hcl عند غليانه علي درجة حرارة 110ْ م في محلول مائي يتكسر بسرعة عندما يصل ال PH إلي 5, 5 .
أنثوسيانات الكالسيوم لا يمكن تعقيمه بالحرارة العالية وذلك لسرعة تكسره بالحرارة .
السكروز الثنائي هو أكثر الكربوهيدرات استخداماً في البيئة يتحللب التعقيم في الأوتوكلاف ليعطي مخلوط من D جليكوز , D فركتوز . بالإضافة إلي ذلك فإن التعقيم الحراري قد يكون له تفاعلات وسيطة داخل البيئة بين الكربوهيدرات والأحماض الأمينية .
البيروكسين يتحلل بسرعة بالحرارة العالية .
ليست هناك تعليقات:
إرسال تعليق